当尼康D300S与尼康D300放在一起的时候，一眼望去很难区分它们之间的差异，拥有相同的147×114×74 mm的机身尺寸。但是细部上来看还是可以发现他们之间的区别，因为增加了视频拍摄功能的缘故，在机身上相应作了一些改变。

　　而从机身前面看去，除了型号名称差异外，尼康D300S比D300多了3个麦克风的小孔。除此以外，没有其他的差别。

　　背面来看，尼康D300S与D300的差异最大。由于尼康D300S具有视频拍摄功能，显示屏右边的按键排列作了调整。具体按键的变化如下：

1、五维方向键新添了中央按钮

2、D300驱动模式转盘里的LV档在五维方向键的下方直接设键

3、增加了扬声器的发声孔

4、info功能单独设键

5、D300上的存储卡舱门开关取消了，存储卡盖直接侧推即可打开。

　　上图为尼康D300与尼康D300S的接口对比，尼康D300S使用的是更为主流的MINI HDMI接口，同时由于视频功能的增加，支持外接立体声麦克风，所以也新添了外置麦克风的接口。其他的接口与D300相同。